昼夜节律是哺乳动物适应地球自转而形成的生理现象，其调控涉及大脑***生物钟和全身各组织的外周生物钟。昼夜节律紊乱，如倒时差或夜班工作，已被证明与多种健康问题相关，包括乳腺癌、2型糖尿病等疾病风险的增加。夜班工作在全球工作人群中普遍存在，欧洲2015年的调查显示19%的劳动者从事轮班工作，2021年的数据显示约38%的人至少偶尔在晚10点至次日凌晨5点之间工作，其中女性比例为27%。

孕期夜班工作可能对胎儿健康产生不良影响，研究表明其与流产、早产和低出生体重等妊娠并发症相关。然而，夜班工作如何通过表观遗传机制影响胎儿仍不清楚。DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰，其在胎儿发育过程中起关键作用。既往研究发现孕期夜班工作与胎盘组织中的DNA甲基化变化相关，但尚无研究探讨其在脐带血中的表现。因此，本研究旨在利用多队列数据，分析孕期夜班工作与新生儿脐带血DNA甲基化的关系，探索昼夜节律紊乱对胎儿健康的潜在表观遗传影响。                                    

孕期夜班工作暴露数据通过各队列的问卷调查收集，由各研究团队根据不同的时间点和定义进行归一化处理，***终归类为“任何夜班工作”与“无夜班工作”两组。脐带血DNA甲基化测定使用Illumina Infinium 450K或EPIC BeadChip芯片进行，不同队列独立完成质量控制和标准化处理。

统计分析采用稳健线性回归模型，调整母体年龄、教育水平、孕期吸烟情况、细胞类型、批次效应和婴儿性别等混杂因素。个体队列分析后，结果进行两阶段荟萃分析，并使用多重校正方法控制假发现率（FDR）。此外，研究还进行了功能富集分析、与既往表观遗传研究对比分析、甲基化数量性状位点（mQTL）分析、基因表达调控甲基化（eQTM）分析，并与小鼠孕期昼夜节律紊乱模型的数据进行比对，以评估相关基因的潜在生物学意义。

进一步分析显示，在一项小鼠孕期昼夜节律紊乱模型研究中，与本研究发现相关的16个位点对应的10个同源基因中，有8个基因在小鼠实验中表现出显著的DNA甲基化改变（富集P=1.62×10⁻¹¹）。此外，功能富集分析表明这些CpG位点涉及多个生物学过程，如胚胎发育、代谢调控和昼夜节律调节。与既往EWAS研究对比，本研究中发现的CpG位点在胎龄、出生体重、BMI以及夜班工作等多个研究中均有所报道，进一步支持其生物学相关性。

此外，甲基化数量性状位点（mQTL）分析揭示了多个CpG位点受遗传因素影响，而基因表达调控甲基化（eQTM）分析则发现这些CpG位点可能调控相关基因的表达，提示其在胎儿发育中的潜在作用。

本研究在大规模多队列数据中发现，孕期夜班工作与新生儿脐带血DNA甲基化的特定位点存在显著关联，并且这些CpG位点与昼夜节律、胎儿生长及代谢相关的基因具有高度一致性。进一步的动物模型研究表明，昼夜节律紊乱可导致胎儿DNA甲基化的广泛变化，支持本研究的发现。

ctDNA的提取在肿瘤筛查中，是重要的前置步骤。目前常用的提取方法是利用生物磁珠，主要是硅羟基磁珠或羧基磁珠对血清血浆的ctDNA进行提取，由于磁珠的粒径小，比表面积大，在特定提取缓冲液中，对核酸的吸附会更加灵敏，相比于其他方法，使用生物磁珠对进行ctDNA提取得率会更高，检测灵敏度和检出限也会更合适，搭配核酸提取仪，更能实现全程自动化的提取。