遗传性I型酪胺酸血症（hereditary tyrosinemia type I， HT1）是一种肝脏遗传病，主要是由于延胡索酰乙酰乙酸水解酶( FAH)基因的一个A->G点突变导致（图2a）。HT1病人需要遵从严格的饮食要求和接受尼替西农（nitisinone, NTBC）的治疗。如果治疗失败，患者会出现肝功能衰竭和肝癌。2月25日，在《自然》子刊《Nature Medical Bioengineering》上刊登的一篇科学论文中，麻省大学的Wen Xue课题组、武汉大学的Hao Yin课题组和Broad 研究所David Liu课题组合作使用基于CRISPR系统的碱基编辑器，***次成功地在成体小鼠模型中治疗了由于G->A基因突变导致的这种罕见肝脏疾病。Chun-Qing Song ( 宋春青，西湖大学研究员) 和Tingting Jiang 是本文的共同***作者。

CRISPR-Cas9基因编辑系统由于其便捷、可编程的特点，自问世以来获得了生命科学研究领域的广泛关注。科学家可以利用CRISPR-Cas系统在基因组的特定位点对DNA序列进行编辑。可是CRISPR基因编辑系统的工作的过程中会产生双链DNA断裂，这导致编辑副产物的出现。

为了弥补这一缺陷，Broad 研究所华人学者David Liu实验室在CRISPR系统的基础上，开发出了碱基编辑器，从而实现了直接将一个碱基或碱基对转换成另一个碱基或碱基对（例如将A-T转换成G-C），并能够在不***的细胞中有效地实现点突变，而且基本不会产生过多的编辑副产物（图1）。这种碱基编辑器具有治疗单基因点突变造成的遗传病的极大潜力。

图1腺嘌呤碱基编辑器abe作用原理

在本研究中，研究人员将腺嘌呤碱基编辑器( adenine base editors, ABEs ) ABE6.3和CRISPR系统一起通过尾静脉高压注射的方式导入到患有遗传性I型酪胺酸血症（hereditary tyrosinemia type I， HT1）的成年老鼠肝脏内。

实验结果表明，接受ABE6.3碱基编辑疗法的HT1小鼠，肝脏中经过编辑的肝细胞数量稳定, 产生了大量含有正常功能的FAH蛋白（图2）。而且接受碱基编辑疗法的小鼠的肝脏功能和生存率大大提高。不仅如此，研究人员还对ABE6.3碱基编辑器进行了优化改进到升级版本RA6.3（图3）。细胞跟体内实验结果证实， 升级版碱基编辑器RA6.3的编辑效率约是初始版本ABE6.3的2倍。此研究表明了碱基编辑器在治疗成年老鼠体内肝脏遗传病的可行性。

图2 abe修复了患有遗传性I型酪胺酸血症（ht1）的成年小鼠

a) HT1中, Fah基因外显子8***后一个碱基G->A的点突变导致所表达的蛋白外显子8缺失,进而使FAH蛋白丧失功能, ABE碱基编辑器通过诱导A->G进而修复FAH蛋白。

b) 将携带Fah基因的导向RNA (sgRNA)的质粒与 ABE质粒一起通过小鼠尾静脉导入到携带HT1疾病小鼠的肝脏中。

c) ABE跟sgRNA 的导入使HT1疾病小鼠维持在正常体重水平。

d) IHC结果显示 ABE跟sgRNA一起修复了小鼠的肝脏细胞。

图3 碱基编辑器ABE6.3的升级版本ra6.3大大提高了碱基编辑效率

a) 通过优化ABE6.3中dCas9的编码序列和添加核定位序列(NLS)得到升级版 ABE6.3(RA6.3)。

b) 在293T细胞中的结果显示, 优化版RA6.3的编辑效率相对于原始ABE6.3大大提高。

c) 与ABE6.3相比,优化版RA6.3在HT1疾病小鼠中介导的肝细胞初始修复数目明显增多。

迄今为止，已知人类致病突变的***大类别是点突变(也称为单核苷酸多态性( SNP ) )，因此，碱基编辑器对于SNPs引起的遗传疾病的研究和治疗具有巨大的推动作用。