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《自然》本周在线发表的一项研究In vivo CRISPR editing with no detectable genome-wide off-target mutations中，针对CRISPR–Cas9基因组编辑的全基因组脱靶效应的***检测系统在小鼠身上完成了测试。研究成果有望促进基因组编辑从研究到临床的转化。
VIVO的概述和验证
Akcakaya et al.
CRISPR–Cas9基因组编辑被认为是人类医学史上具有巨大潜力的创新技术，但只有完全识别并消除额外的非目标（脱靶）突变，这项技术才能实现临床应用。脱靶突变是指CRISPR–Cas9复合物附着在基因组的多位点上，并切割了错误的DN***段。检测这种突变的系统必须在体外以及整个生物体内都进行测试。
美国麻省总医院的J. Keith Joung，瑞典阿斯利康的Marcello Maresca及同事描述了一种灵敏度较高的“体内脱靶验证”（verification of in vivo off-targets，VIVO）系统，可以检测CRISPR–Cas9在生物体中的脱靶突变。VIVO会事先识别出潜在的脱靶位点，在基因组编辑后再确认这些位点中是否有位点发生了改变。
作者在小鼠肝脏中检测了该系统的准确度，方法是设计出靶向小鼠体内Pcsk9基因的不同的向导RNA（gRNA），包括混杂性(可以靶向多位点)的gRNA和特异性更高的gRNA。作者证实VIVO不仅能检测到混杂性gRNA诱导的数十种脱靶突变（包括发生率仅为0.13%的突变），而且正确设计的gRNA并不会带来任何可检测到的脱靶突变。
作者认为，VIVO 为定义基因组编辑在实际应用中的脱靶效应设立了重要标准，并证实了设计出特异性极高的gRNA的重要性。ⓝ
Nature|doi:10.1038/s41586-018-0500-9
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